荧光定量pcr仪器耗材（荧光定量pcr仪器用途）

实时荧光定量PCR——RT-QPCR

1、RT-QPCR，即实时荧光定量聚合酶链式反应，是Q-PCR（定量PCR）的一种重要类型，广泛应用于生物学和医学研究中的多种分析，包括但不限于扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型以及SNP（单核苷酸多态性）分析。技术原理与特点 RT-QPCR结合了反转录（RT）和荧光定量PCR（Q-PCR）两大技术。

2、定义：实时荧光定量逆转录PCR，是qPCR和RT-PCR的组合技术。它首先通过逆转录将RNA转化为cdnA，然后以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR扩增。分类：RT-qPCR定量分析RNA也有两种方法：一步法和两步法。一步法中的RT和qPCR在同一试管中进行，两步法中的RT和qPCR是按顺序分开进行。

3、RT-PCR则结合了逆转录和PCR，将RNA逆转录成cDNA，再进行PCR扩增，适用于基因表达分析。与PCR相比，它增加了RNA模板的获取步骤，但无法进行定量分析。qPCR，即实时荧光定量PCR，引入荧光监测技术，实现了从定性到定量的飞跃，广泛用于基因定量、基因表达监控等。

4、- 实时荧光定量逆转录PCR（RT-qPCR）：结合了荧光定量和RT-PCR，用于定量分析RNA。结语与比较 总结不同PCR方法，可以得出以下比较： 普通PCR：仅用于定性扩增。 qPCR：适用于定量分析，有荧光染料法和荧光探针法两种。 RT-PCR：专门用于RNA转录本分析，结果只能定性。

快速了解荧光定量PCR与数字PCR区别

荧光定量PCR：该技术是在PCR反应体系中加入荧光报告基团和荧光淬灭基团。随着PCR反应的进行，扩增产物不断积累，导致荧光信号不断积累。通过实时监测荧光信号的变化，可以反映整个PCR进程。荧光信号的强度与PCR扩增产物的数量呈对应关系，从而实现对起始模板DNA的定量。

荧光定量PCR：基于荧光信号强度与PCR产物数量之间的线性关系进行定量。在PCR反应过程中，随着DNA模板的指数扩增，荧光信号也随之增强。通过实时监测荧光信号的变化，可以计算出初始模板DNA的数量。数字PCR：通过将样品分散到大量的微小反应单元中，每个单元包含少量或单个DNA模板分子，然后进行PCR扩增。

数字 PCR 是通过将样本DNA随机分布至独立的反应单元中，每个反应单元中包含或者不包含1个或多个拷贝的目标分子，所有独立的反应单元进行平行扩增后，对每个反应单元的阴性或者阳性荧光信号进行检测并进行统计学分析，就可以计算出原始样本的拷贝数，无需参考标准品或内源性对照品，也不需要标准曲线。

PCR技术是一个大家族，包括普通PCR、实时荧光定量PCR、数字PCR、RTPCR以及RTqPCR等。普通PCR：这是最基本的PCR技术，通过常规的PCR扩增仪扩增靶基因，产物通常通过琼脂糖凝胶电泳进行定性分析。实时荧光定量PCR：在PCR体系中加入荧光染料或荧光探针，实时监测扩增产物量的变化。

实时荧光定量PCR（qPCR）是在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或荧光基团，通过实时监测荧光信号来定量分析。数字PCR（dPCR）不依赖于Ct值和标准曲线，实现PCR的绝对定量。逆转录PCR（RT-PCR）是将RNA逆转录成cDNA，再进行DNA扩增。

其核心优势在于检测结果不受PCR扩增效率、样本抑制物等因素影响，具有更高的准确性和重复性，尤其适用于低病毒载量（如100 IU/mL）的精准定量，以及抗病毒治疗疗效评估和耐药突变监测。

如何选择合适的PCR耗材

1、综上所述，PCR耗材的选择需综合考虑材质、体积、盖型、颜色、管壁厚度、裙边、切角与标识、孔缘以及封板膜等多个因素。通过合理选择，可以确保PCR实验的准确性和高效性。

2、选择合适的PCR耗材，需考虑以下关键因素：材质 PCR耗材，如PCR管（EP管）、8连排管、96孔PCR板、深孔板等，一般选用聚丙烯（PP）材质。这是因为PP材质具有生物学惰性，表面不易粘附生物分子，且具有良好的化学耐性和温度耐受性（可121℃高压灭菌，也可承受热循环过程中的温度变化）。

3、普通PCR仪耗材：对于Bio-Rad的普通PCR仪（如C1000、C1000 Touch、T100、iCycler、MyCycler、Tetrad等），推荐使用0.2mL板子（货号：AI02009）。Roche品牌 Roche品牌主流的qPCR仪包括LigHTCycle96和LightCycler480II两款。